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人白介素8(IL-8CXCL8)ELISA檢測試劑盒技術(shù)說明書
BS-1551 人白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA試劑盒
一、產(chǎn)品信息
產(chǎn)品名稱?：人白介素8(IL-8/CXCL8)酶聯(lián)免疫吸附測定試劑盒
規(guī)格?：96孔板/48孔板(可選)
檢測方法?：雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
檢測范圍?：7.81-500 pg/mL(具體以實(shí)際產(chǎn)品說明為準(zhǔn))
靈敏度?：≤4.69 pg/mL(具體以實(shí)際產(chǎn)品說明為準(zhǔn))
樣本類型?：血清、血漿、細(xì)胞培養(yǎng)上清液、細(xì)胞裂解液等生物樣本
保質(zhì)期?：6個(gè)月(2-8℃避光保存，具體以產(chǎn)品標(biāo)簽為準(zhǔn))
用途?：僅供科研使用，不可用于臨床診斷或治療
二、檢測原理
本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。預(yù)先包被在酶標(biāo)板孔中的抗人IL-8/CXCL8單克隆抗體捕獲樣本或標(biāo)準(zhǔn)品中的目標(biāo)抗原。加入生物素標(biāo)記的檢測抗體后，形成“包被抗體-抗原-檢測抗體"復(fù)合物。隨后加入辣根過氧化物酶標(biāo)記的親和素，通過特異性結(jié)合完成信號(hào)放大。洗滌去除未結(jié)合成分后，加入TMB顯色底物。辣根過氧化物酶催化底物反應(yīng)，生成藍(lán)色產(chǎn)物，加入終止液后變?yōu)辄S色。顏色的深淺與樣本中IL-8/CXCL8的濃度成正比，通過酶標(biāo)儀在450nm波長處測定吸光度值，依據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣本濃度。
三、試劑盒組成
預(yù)包被抗體酶標(biāo)板?：96孔或48孔，含抗人IL-8/CXCL8單克隆抗體
標(biāo)準(zhǔn)品?：凍干粉，復(fù)溶后形成系列濃度梯度
樣本稀釋液?：用于稀釋樣本和標(biāo)準(zhǔn)品
生物素標(biāo)記檢測抗體?：與目標(biāo)抗原特異性結(jié)合
生物素標(biāo)記抗體稀釋液?：用于稀釋生物素標(biāo)記檢測抗體
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素?：信號(hào)放大試劑
酶結(jié)合物稀釋液?：用于稀釋辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素
濃縮洗滌液?：20×濃縮液，需用去離子水稀釋
顯色底物(TMB)?：避光保存
終止液?：含稀硫酸，具輕微腐蝕性
封板膜?：用于溫育時(shí)密封酶標(biāo)板
說明書?：詳細(xì)操作指南
四、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備
1. 樣本收集與處理
血清樣本?：全血室溫靜置2小時(shí)或4℃過夜，2000rpm離心20分鐘，取上清。4℃保存1周內(nèi)檢測，長期保存需分裝凍存于-20℃以下，避免反復(fù)凍融。
血漿樣本?：使用EDTA或肝素抗凝，處理方法同血清。
細(xì)胞培養(yǎng)上清?：2000rpm離心20分鐘去除細(xì)胞碎片，取上清檢測。
樣本稀釋?：若樣本濃度超出檢測范圍，需用樣本稀釋液稀釋后重新檢測。
2. 試劑準(zhǔn)備
濃縮洗滌液?：用去離子水按1:20比例稀釋，室溫平衡后使用。
標(biāo)準(zhǔn)品?：按說明書要求用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液復(fù)溶，輕柔混勻避免氣泡，形成系列濃度梯度。
生物素標(biāo)記檢測抗體?：使用前用生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋。
辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素?：使用前用酶結(jié)合物稀釋液稀釋。
3. 自備器材
酶標(biāo)儀(450nm波長)
微量移液器及吸頭
洗板機(jī)或洗瓶
37℃恒溫箱或水浴鍋
去離子水
五、操作步驟
加樣?：從平衡至室溫的鋁箔袋中取出所需板條，設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、樣本孔和空白孔。標(biāo)準(zhǔn)品孔加入系列濃度標(biāo)準(zhǔn)品50μL，樣本孔加入待測樣本50μL，空白孔不加。
溫育?：除空白孔外，每孔加入100μL稀釋后的生物素標(biāo)記檢測抗體，封板膜封住反應(yīng)孔，37℃溫育60分鐘。
洗滌?：棄去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液(350μL)，靜置1分鐘后甩去，重復(fù)洗滌3-5次，拍干。
加酶標(biāo)物?：每孔加入100μL稀釋后的辣根過氧化物酶標(biāo)記親和素，封板膜封住，37℃溫育30分鐘。
洗滌?：同步驟3。
顯色?：每孔加入90μL顯色底物(TMB)，37℃避光顯色15-30分鐘。
終止?：每孔加入50μL終止液，終止反應(yīng)(藍(lán)色變?yōu)辄S色)。
檢測?：30分鐘內(nèi)用酶標(biāo)儀在450nm波長處測定吸光度值(OD值)。
六、結(jié)果計(jì)算
以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)樣本OD值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中計(jì)算樣本濃度。若樣本經(jīng)稀釋，結(jié)果需乘以稀釋倍數(shù)。
七、注意事項(xiàng)
試劑平衡?：所有試劑和樣本使用前需平衡至室溫(20-25℃)，避免溫度差異影響結(jié)果。
試劑保存?：未使用試劑需及時(shí)放回2-8℃保存，避免反復(fù)凍融濃縮洗滌液。
操作規(guī)范?：
避免試劑和樣本交叉污染。
洗板時(shí)確保孔內(nèi)液體被充分吸干，但避免過度干燥。
顯色底物需避光保存，使用前應(yīng)為無色或淺色。
終止液具腐蝕性，避免接觸皮膚和衣物。
質(zhì)量控制?：
每次實(shí)驗(yàn)設(shè)置空白孔和標(biāo)準(zhǔn)品孔。
板內(nèi)、板間變異系數(shù)應(yīng)小于10%。
回收率應(yīng)在80%-120%之間。
樣本處理?：所有樣本視為潛在傳染源，操作時(shí)需佩戴防護(hù)裝備，廢棄物按生物安全規(guī)范處理。
八、產(chǎn)品性能
靈敏度?：≤4.69 pg/mL(具體以實(shí)際產(chǎn)品說明為準(zhǔn))。
特異性?：與IL-8類似物無交叉反應(yīng)。
精密度?：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
回收率?：80%-120%。
線性范圍?：7.81-500 pg/mL(具體以實(shí)際產(chǎn)品說明為準(zhǔn))。
注：以上僅供參考，本產(chǎn)品僅供科研使用，不作為實(shí)際數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)需嚴(yán)格遵循說明或咨詢技術(shù)老師。
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