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如何判斷低吸附培養(yǎng)板是否失效?
顯微鏡觀察法
低吸附培養(yǎng)板失效時，細胞會異常貼壁或形成團塊。鏡下觀察：
正常狀態(tài)?：細胞懸浮生長，呈均勻分散的球狀或聚集體?。
失效表現(xiàn)?：細胞貼壁生長(如呈鋪路石狀)或出現(xiàn)大量死細胞碎片?。
臺盼藍染色法
操作?：取細胞懸液與臺盼藍染液1:1混合，3分鐘內(nèi)鏡檢。
結(jié)果?：活細胞(膜完整)無色，死細胞(膜破損)染藍?。若活細胞率<80%，可能提示培養(yǎng)板表面吸附性異常。
培養(yǎng)液狀態(tài)
正常?：培養(yǎng)液清亮，無渾濁或沉淀?。
異常?：培養(yǎng)液變黃、渾濁或出現(xiàn)絮狀物，可能因細胞代謝異常或污染導(dǎo)致?。
細胞活性檢測
MTT法?：活細胞代謝還原紫色結(jié)晶，吸光度值高;失效時吸光度顯著下降。
熒光染色?：Calcein-AM標記活細胞(綠色)，PI標記死細胞(紅色)。若死細胞比例驟增，需懷疑培養(yǎng)板問題。
綜合判斷?：若顯微鏡下細胞貼壁、臺盼藍死細胞率>20%、培養(yǎng)液渾濁且MTT吸光度低，則培養(yǎng)板很可能失效。
注：供科研使用，以上資料供參考。
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